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卵巢癌症（OC）是一种高度恶性疾病，10年生存率低于?30%，造成年全球超过20万人死亡。不幸的是，绝大多数患者都患有无法治愈的晚期OC，其5年生存率为??20%。OC目前的标准护理是肿瘤细胞减灭手术，然后主要是基于铂的化疗方案。因此，迫切需要确定有效的生物标志物，用于OC的早期筛查、治疗反应和预后。血清肿瘤标志物癌症抗原（CA-）是目前用于OC诊断和监测的金标准生物标志物，其敏感性在早期OC小于60%，晚期可达80%。虽然CA-是OC的一种有吸引力的非侵入性标志物，但必须提高其敏感性和特异性，才能将其作为筛查的标志物。

cf-miRNAs也是一种有希望的微创临床生物标记物，用于癌症患者的特征分析。miRNA是20-25个核苷酸长的非编码RNA，能够通过抑制翻译或mRNA降解来调节基因表达。Cf-miRNAs在体液（如血浆）中非常稳定，因此成为早期癌症检测的理想非侵入性诊断工具。总cfDNA也是一种潜在的液体活检标记物，利用cfDNA，有可能分析来自肿瘤部位的特定改变，如突变、拷贝数改变或异常的DNA甲基化模式。然而，对于早期检测而言，癌症特异性cfDNA的低丰度和背景DNA的高丰度带来了巨大的挑战。到目前为止，cfDNA中只有一种甲基化标记SEPT9被转化为临床筛查，其检测结直肠癌的特异性为79%，敏感性为68%。

近日，一组来自德国的研究团队在杂志Scientificreports上发表了一篇题为“Circulatingcf?miRNAasamoreappropriatesurrogateliquidbiopsymarkerthancfDNAforovariancancer”的文章。在这项探索性病例对照研究中，研究团队试图评估OC血浆和组织样本中cf-miRNA和相应启动子甲基化的组合，作为潜在的液体活检标志物。研究结果表明，cf-miRNA比cfDNA更有潜力作为OC的替代标志物；未来应探索其与其他标志物的组合，如蛋白质或突变。

图片来源：Scientificreports

主要内容

OC中循环cfDNA和

cf-miRNA的水平总体上调

研究团队首先评估了与良性病变患者或健康女性相比，OC患者是否具有更多的cfDNA和cf-miRNA量。使用独立的分离方法从匹配的血浆样品中分离出cfDNA和cf-miRNA。因为健康对照组和良性组之间没有差异，两组合并称为“非恶性”。结果显示，与非恶性组比较，OC病例中cfDNA和cf-miRNA的数量显著增加（下图A，B），且循环cfDNA和miRNA的总量呈正相关（下图C）。

循环cfDNA和cf-miRNA在OC中上调。

图片来源：Scientificreports

循环cf-miRNA而非cfDNA

是OC生存率的独立标志物

最近的研究表明，cf-miRNA的总水平在乳腺癌和OC中都具有预后价值。由于在OC中cfDNA水平与cf-miRNA水平相似地增加，假设cfDNA水平也可能与患者的预后有关。

血浆用于两种分析（n?=?72），结果表明cf-miRNA水平与生存率显著相关。但cfDNA水平与生存率不显著相关。使用grade、CA-、Rstatus、FIGO分期和年龄作为分类变量进行了单变量和多变量cox回归分析。在单变量分析中，只有cfDNA和cf-miRNA水平是生存率的重要预测因素。在包括FIGO分期、cfDNA和cf-miRNA水平在内的多变量分析中，只有cf-miRNA仍然是生存率的重要独立预测因子（下图C，D）。但cfDNA和cf-miRNA均与无进展生存期无显著相关性。

循环miRNA是OC的预后生物标志物。

图片来源：Scientificreports

循环miR-c和miR-是

OC的替代标志物与不良临床特征相关

接下来，研究团队着手了解哪些miRNA使OC患者总miRNA水平的增加。此前曾鉴定出7种miRNA可以作为OC的诊断标志物。其中miR-c已经被证明在OC中上调。由于miR-c通常与miR-共同转录且共同表达，作者通过qRT-PCR分析了OC血浆和匹配组织中这两种miRNA的表达。在OC的血浆和组织中，miR-c和miR-均显著增加（下图A，B）。此外，miR-c和-循环水平的增加与许多不良临床特征显著相关，突出了它们作为OC替代标志物的潜力（下图C）。

循环miR-c和miR-是OC的潜在替代标记物。

图片来源：Scientificreports

miR-c和miR-的

启动子甲基化与组织表达水平相关

与良性疾病相比，肿瘤组织的基因组DNA中存在高度显著的启动子低甲基化（下图A），这与匹配组织样本中miR-c过度表达显著相关（下图B）。但在血浆样品中观察到miR-c启动子甲基化没有显著差异（下图C）。总的来说，与组织相比，血浆中甲基化的变化要广泛得多，在匹配的血浆cfDNA甲基化和miRNA表达之间观察到轻微但显著的相关性（下图D），这表明至少在一定程度上，cfDNA的甲基化图谱反映了原发性肿瘤的甲基化谱。总之，cfDNA中miR-c启动子的甲基化部分反映了OC中肿瘤组织的甲基化。

miR-c启动子甲基化与组织中的表达相关。

图片来源：Scientificreports

总结与讨论

这篇文章是OC中仅有的同时研究cf-miRNA、cfDNA、全血和匹配组织样本的研究。与cfDNA相比，研究团队再次证明了cf-miRNA水平作为生存的独立预后标志物的潜力，还提出了两种循环miRNA有潜力作为OC的替代标志物。研究结果表明，在OC中，循环miRNA可能是比cfDNA更合适的液体活检标记物，未来应探索与其他标记物（如蛋白质或突变）的组合，以评估疾病诊断和治疗监测的选择。

与总cfDNA相比，cf-miRNA更适合作为OC的替代标志物和理想的血浆生物标志物。首先，miR-c在内的miRNA在血液中高度稳定，可以从μl的血浆中获得，通过简单的扩增方法很容易在健康和患病个体中检测到。相反，在健康个体中很难检测到cfDNA，分析所需的血液量至少为2毫升。与cfDNA甲基化相比，cf-miRNA更能代表相应的组织。miR-启动子在一组与miRNA表达密切相关的组织中显著低甲基化。

尽管两种核酸的相关性很显著，但miRNA水平在临床特征方面超过了cfDNA。特别是，miRNA水平与OS密切相关，之前在OC和乳腺癌中都表明了这一点。作为预后标志物，cf-miRNA可能比传统的活检更具信息量。对此的一个潜在解释可能是由于miRNA在循环中的保护作用。DNA片段从肿瘤或血细胞中释放，而miRNA要么被包装到细胞外小泡中，要么以蛋白质复合物的形式从细胞中输出。这些机制可以保护cf-miRNAs免受降解，并可能解释为什么它们对癌症的特异性比对cfDNA的特异性更好。

来源：小桔灯网

作者：动力彩虹